Fundamentos de Biocare: Sondas de breakapart

Diseñados para unirse complementariamente a secuencias de interés en una muestra celular, estas "sondas" de ADN construidas se marcan con etiquetas fluorocromáticas; los fluorocromos generan luz fluorescente cuando se excitan con un microscopio especializado, lo que permite visualizar el sitio de unión.

La presencia de la señal fluorescente muestra que la sonda se ha hibridado con éxito con la secuencia objetivo, lo que indica que la secuencia está presente.

Un tipo de anomalía genética que se utiliza para detectar la FISH es una mutación por translocación. Una mutación por translocación se produce cuando un trozo de un cromosoma se desprende y se une a otro cromosoma.

Esto puede dar lugar a una mutación de fusión genética, ya que la translocación fusiona dos genes que antes estaban separados, las mutaciones de translocación se han identificado como un factor causal en varios estados de enfermedad y trastornos como la leucemia, el cáncer de mama, la distrofia muscular y el síndrome de Down.

Algunos genes se han asociado con múltiples mutaciones de translocación diferentes que se han asociado con el cáncer, en este caso, en lugar de utilizar sondas de fusión duales específicas para comprobar cada posible translocación, se utiliza una sonda break-apart para comprobar si el gen de interés se ha translocado en general.

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Una sonda break-apart utiliza dos sondas de colores diferentes para unir secuencias a ambos lados de un gen de interés conocido. Una sonda de control separada en un tercer color se une a otra secuencia para confirmar que la hibridación ha sido exitosa, si el gen ha permanecido en su sitio, los dos colores (en este caso, rojo y verde) aparecerán juntos, pero si ha habido una translocación, las dos sondas se "separarán" y los colores rojo y verde aparecerán separados.

Las sondas de ruptura son menos específicas que las sondas de doble fusión y proporcionan menos información, ya que no definen el lugar exacto al que se ha translocado el gen de interés. Sin embargo, si el diseño del procedimiento es adecuado, pueden dar resultados claros y fáciles de interpretar, ya que la separación de dos señales es fácilmente reconocible al microscopio.

Aun así, hay que definir cuidadosamente lo que constituye una señal "normal", ya que las señales normales pueden aparecer ocasionalmente ligeramente separadas, dependiendo de la localización y la estructura del ADN, para evitar resultados falsos positivos, una señal podría puntuarse como positiva sólo a una determinada distancia.

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