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Inmunotinción Multiplex: simultánea vs. Secuencial

CK HMW + p63 + AMACR. Foto de Biocare Medical.

Muchos instrumentos automatizados de inmunohistoquímica (IHQ) ofrecen una opción para realizar inmunotinción Multiplex, también conocida como Multiplexación. La multiplexación se utiliza para identificar la presencia de múltiples marcadores biológicos en una sola muestra de tejido, lo que permite al patólogo analizar varios objetivos al mismo tiempo para ayudar en el diagnóstico. Sin embargo, no toda la multiplexación es igual.

En la actualidad, algunos instrumentos IHQ solo permiten métodos de tinción secuencial. Los procedimientos secuenciales fueron los primeros en ser desarrollados y consisten en múltiples antígenos etiquetados uno tras otro en "secuencia". En comparación con los procedimientos simultáneos, el proceso de tinción secuencial requiere sustancialmente más tiempo, generalmente de 40 a 60 minutos adicionales por biomarcador objetivo. A continuación, se muestra un procedimiento de muestra para la tinción secuencial:

Paso 1
1ᵉʳ objetivo Ab
Paso 2
1ʳᵃ detección
Paso 3
1ᵉʳ Cromógeno
Paso 4
Desnaturalización
Paso 5
2ⁿᵈᵒ objetivo Ab
Paso 6
2ⁿᵈᵃ detección
Paso 7
2ⁿᵈᵒ Cromógeno

Antígeno
Conejo
Ratón
Anticuerpo primario
AP anti-conejo
HRP anti-ratón
AP
HRP
Anticuerpo primario
Fast Red
DAB
Cromógeno

Otros instrumentos IHQ, como intelliPATH FLX e IQ3000 de Biocare, admiten tinciones secuenciales y simultáneas, mientras que ONCORE
Pro solo admite tinciones multiplex simultáneas. La tinción simultánea suele utilizar anticuerpos primarios combinados y sistemas de detección,
lo que reduce significativamente los pasos del protocolo y el tiempo de respuesta general. Los cócteles de anticuerpos primarios se componen de diferentes especies animales,
diferenciando los biomarcadores objetivo. Un protocolo típico para la tinción simultánea consiste en la recuperación de un epítopo, un cóctel de anticuerpos primario incubación, una incubación de anticuerpo secundario en cóctel, 1ª incubación con cromógeno, seguida de la 2ª incubación con cromógeno.

Paso 1
Cóctel de anticuerpos de conejo y ratón
Paso 2
Adición de detección Multiplex
Pasos 3 y 4
Adición de cromógenos

Antígeno
Conejo
Ratón
Anticuerpo primario
AP anti-conejo
HRP anti-ratón
AP
HRP
Anticuerpo primario
Fast Red
DAB
Cromógeno

A modo de comparación, una tinción IHC multiplex de próstata de rutina realizada secuencialmente en Ventana Benchmark Ultra tarda en promedio al menos 2 horas más que cuando se realiza simultáneamente en Biocare intelliPATH FLX.1 Cuando se trabaja contra reloj, este ahorro de tiempo, junto con el tejido del paciente , resulta más beneficioso.


¿Está interesado en ahorrarle tiempo y tejido a su laboratorio? Biocare ofrece una variedad de anticuerpos primarios combinados y sistemas de detección multiplex que pueden ayudar a lograr estos objetivos. Disponibles en formatos prediluidos, estos anticuerpos primarios y secundarios combinados se pueden utilizar tanto manualmente como en la mayoría de los instrumentos IHQ automatizados. Para obtener más información, llame al 55 56.77.95.11.

Biocare Medical Multiplex
CK 5/14 + p63 + CK 7/18 (izquierda y centro) y CK HMW + p63 + AMACR (derecha) excelentes ejemplos de cócteles de anticuerpos de Biocare y uso de detección multiplex

Capacidades Multiplex de instrumentación IHQ de Biocare Medical
  • Instrumento
    Capacidad simultánea Multiplex
    Capacidad secuencial Multiplex
  • intelliPATH FLX
    Logo_Buena práctica
    Logo_Buena práctica
  • ONCORE Pro
    Logo_Buena práctica
    Logo_Mala práctica
  • IQ3000
    Logo_Buena práctica
    Logo_Buena práctica

1. Myers J. (2018, May) Chromogenic Multiplex Immunostaining: A Clinically Useful Procedure That Hasn’t “Caught On” (and Why). Presented at The 2018 Tri-State Histology Symposium, Maddison, WI. http://www.whs.wildapricot. org/resources/Documents/Chromogenic%20Multiplex%20Immuno-Staining%20Joe%20Myers.pdf

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