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En la preparación de secciones de parafina para la tinción, la fijación y el procesamiento van de la mano; la fijación adecuada del tejido garantiza que el procesamiento del tejido sea efectivo, y el método de procesamiento elegido por el laboratorio también puede influir en la elección del fijador.
Los errores en la etapa de procesamiento tienen el potencial de afectar seriamente la calidad de la tinción, sin embargo, dado que las muestras de tejido varían mucho en tamaño, tipo, volumen y método de fijación, no puede haber un protocolo de procesamiento universal.
Los técnicos de laboratorio deberán tener en cuenta todos los factores individuales al programar los protocolos de procesamiento y deben estar familiarizados con los signos de errores de procesamiento comunes.
El procesamiento de tejidos se puede resumir en tres pasos: deshidratación, limpieza e infiltración, los procesadores de tejidos automatizados también incluirán pasos de fijación adicionales antes de la fase de deshidratación,si bien el paso de fijación sirve para preservar las estructuras celulares, el propósito final del procesamiento de tejidos es fortalecer y reforzar esas estructuras para que puedan cortarse finamente en secciones de 4 a 5, mientras se mantiene su integridad celular.
Después de la fijación, una solución de deshidratación eliminará las moléculas de agua no unidas y cualquier fijador residual; en todas las etapas, se deben monitorear y controlar los tiempos y las temperaturas,si las muestras se someten a un calor excesivo o se dejan en solución durante demasiado tiempo, las moléculas de agua unidas y no unidas se eliminarán del tejido.
Esta deshidratación excesiva hace que el tejido se endurezca demasiado y se encoja, creando una apariencia arrugada, en la sección comúnmente conocida como artefacto de “tierra reseca”, esto afectará negativamente la morfología celular y la antigenicidad, para evitar esta distorsión, los técnicos deben consultar las pautas recomendadas para los tiempos y temperaturas de procesamiento, que pueden variar según el tamaño y el tipo de tejido.
Por el contrario, la deshidratación incompleta dejará la muestra demasiado blanda, lo que impedirá la limpieza y la infiltración completas con la cera de parafina. En este caso, las secciones pueden ser difíciles de obtener o pueden desintegrarse antes de que puedan transferirse al portaobjetos, las muestras blandas también serán vulnerables a la indentación del casete de tejido o la esponja, lo que aparecerá como un artefacto durante la tinción, para remediar esto, las soluciones deben cambiarse periódicamente para evitar que las soluciones de deshidratación se diluyan con la solución fijadora y el agua eliminadas.
Después de la deshidratación, las soluciones de limpieza reemplazan las soluciones de deshidratación y preparan el tejido para la infiltración con un medio de soporte, generalmente cera de parafina. Una limpieza inadecuada dejará el tejido demasiado blando para seccionarlo de manera efectiva.
Sin embargo, un aclaramiento excesivo puede causar la desnaturalización de las proteínas, creando efectos adversos similares a la sobredeshidratación; una vez más, los tiempos de exposición deben optimizarse para que se conserve la antigenicidad y la parafina pueda infiltrarse con éxito en el tejido.
Una vez más, la temperatura debe monitorearse y controlarse de cerca durante la infiltración, ya que la parafina sobrecalentada también puede causar contracción y endurecimiento excesivo, el tejido sobreprocesado puede ser muy difícil de remediar y es posible que no se puedan recuperar las muestras.
Sin embargo, si las secciones muestran signos de procesamiento insuficiente, los bloques de parafina se pueden derretir para que la muestra se pueda reprocesar, a partir del paso de fijación automática; una vez que el tejido se ha procesado con éxito, los laboratorios deben "desfijar" las secciones para recuperar los antígenos que se habrían oscurecido con la fijación y el procesamiento adecuados.
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