La recuperación de antígenos (AR) es una parte fundamental de cualquier protocolo de inmunohistoquímica (IHC). Sin embargo, con tantos nombres diferentes para este proceso, puede ser difícil reconocer a qué se refiere un protocolo o documento individual
¿Por qué a veces se le llama “recuperación” y otras veces simplemente "pretratamiento?" ¿ER es lo mismo que AR? ¿Qué pasa con HIER y PIER? Para entender el origen de todos estos términos, primero debemos entender el concepto de AR en sí mismo.
La tecnología AR se desarrolló por primera vez hace unos 50 años debido a la necesidad de contrarrestar la acción del formaldehído como fijador. Durante más de cien años, la fijación basada en formaldehído ha sido el estándar en patología quirúrgica, debido a su confiabilidad, disponibilidad y costo relativamente bajo.
Por lo que ha sido necesario desarrollar métodos de tinción IHC teniendo en cuenta el tejido fijado con formaldehído.
La investigación actual sugiere que el formaldehído (y por extensión su derivado común, la formalina) forma enlaces cruzados entre los aminoácidos laterales cadenas en proteínas tisulares.
Esto estabiliza las proteínas tisulares pero, como efecto secundario, también enmascara los sitios de unión del epítopo en cualquier antígeno de interés, impidiendo que se unan a los anticuerpos.
Además, el formaldehído puede alterar los enlaces de hidrógeno y las interacciones electrostáticas que moldean las proteínas en sus configuraciones particulares, cambiando la forma de los sitios de unión del epítopo, lo que interrumpe aún más cualquier posible unión del anticuerpo al epítopo.
Antes de teñir, estas acciones disruptivas se deben deshacer, recuperando así los epítopos del antígeno para unirlos nuevamente. Este proceso se ha denominado recuperación de antígeno (AR) o recuperación de epítopo (ER). Estos dos términos son equivalentes, pero el último se refiere específicamente a la sitios de unión del epítopo en el antígeno.
El proceso de recuperación también se conoce como recuperación de antígeno o epítopo, desenmascaramiento o simplemente pretratamiento.
Los primeros métodos AR involucraron el uso de enzimas proteasas en varios tiempos y concentraciones para romper los enlaces cruzados de fijación.
El método se conoce como recuperación enzimática de antígenos o digestión enzimática. A veces también se escribe como Recuperación de epítopos inducidos por proteolíticos (PIER) o recuperación de epítopos inducida por proteasa (PIER).
Sin embargo, algunos antígenos se ven afectados negativamente por la digestión enzimática, por lo que la introducción de la tecnología AR inducida por calor hace unos 20 años ha sido muy exitosa y aceptada
Más tarde fue un gran avance, se plantea la hipótesis de que la desnaturalización de proteínas inducida por calor rompe los enlaces cruzados del fijador.
El uso de las soluciones amortiguadoras calentadas controlan el pH, lo que afecta la configuración de las proteínas y optimiza los resultados.
El uso de calor para recuperar antígenos se refiere como Recuperación de antígenos inducida por calor (HIAR) o Recuperación de epítopos inducida por calor (HIER).
Para agregar a la lista de términos, las compañías individuales de IHC también pueden tener nombres patentados para sus reactivos AR. Es posible que algunos proveedores solo ofrezcan uno solución HIER, mientras que otros proporcionan una variedad de soluciones amortiguadoras de varios niveles de pH y composiciones para ajustar el proceso AR.
Biocare Medical adopta el último enfoque y ofrece una línea de soluciones (buffer) HIER denominadas soluciones de eliminación de la capa, cada una con un pH único y composición para garantizar que la recuperación de antígenos para cada marcador IHC sea lo más óptima posible. Si se requiere recuperación proteolítica, Biocare también ofrece varias enzimas proteasas diferentes como parte de nuestra línea Carezyme.
Vea nuestra ilustración de recuperación inducida por calor frente a recuperación enzimática en la página siguiente.
Recuperación inducida por calor Vs. recuperación enzimática
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